豬圓環(huán)病毒（2型）抗體檢測試劑盒

需自備的設備及試劑

微量移液器： 0.5μl～10μl、10μl～100μl、100μl～1000μl。 一次性移液器吸頭。 量筒：500ml。 96孔板酶標儀。 蒸餾水或去離子水。 洗瓶或洗板機。

樣品制備

取動物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。

洗滌液的準備

濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫，如有鹽結晶，搖動使結晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右豬圓環(huán)病毒（2型）抗體檢測試劑盒

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樣品的稀釋

在血清稀釋板中按1：101的體積比稀釋待檢血清（例如：200μl樣品稀釋液中加2μl待檢血清）。

注意：陰性和陽性對照不用稀釋。取每個樣品后都要更換吸頭，準確記錄每個樣品在板上的位置。每個樣品在加入到包被板微孔前應充分混勻。

操作步驟

豬圓環(huán)病毒（2型）抗體檢測試劑盒取預包被的檢測板（根據(jù)樣品*，可拆開分次使用），將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測板孔中。同時設陰性、陽性及空白對照各1孔，取陰性及陽性對照各100μl

分別加入反應孔中，空白對照僅加入100μl樣本稀釋液。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）。

蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗3次。每次用洗滌液注滿板孔（約350μl），靜置1分鐘后甩掉。洗滌3次后在干凈吸水紙上拍干。 每孔加酶結合物100μl，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌3次, 方法同2。切記*在干凈吸水紙上拍干。 每孔先加底物A液50μl、再加底物B液50μl，混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。 每孔加終止液50μl，使反應終止，10分鐘內(nèi)測定結果。

結果判定

以空白對照調(diào)零用酶標儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度A值。試驗成立的條件是陽性對照孔A450值大于或等于0.4，陰性對照孔A450值必須小于0.1。如果試驗無效，試驗中的操作值得懷疑，試驗應重做，并仔細檢察各組分。

樣品A450值大于0.25+陰性對照孔均值，判為陽性；樣品A450值小于0.25+陰性對照孔均值，判為陰性；如陰性對照孔均值小于0.05按0.05計算。

有效期

貯存方法： 2 - 8oC下貯存。

有效期： 12個月。